货号: JFKR-N2-5/JFKR-N2-50
捷方凯瑞生产的N-2 Supplement (100X),是一种化学成分确定的经过滤除菌的100X浓缩型细胞培养添加剂,N-2 Supplement具有促进细胞生长和存活的作用,特别适合类器官培养构建,也可广泛用于神经元、神经干细胞、神经瘤细胞等的培养,以及多能干细胞的培养和定向分化。
本产品组分为饱和转铁蛋白、重组胰岛素、孕酮、腐胺、亚硒酸钠等。胰岛素在哺乳动物细胞的合成代谢方面起重要作用,可以促进细胞对葡萄糖和氨基酸的吸收、脂肪的生成、蛋白和核酸的合成,并促进细胞增殖;转铁蛋白是铁离子的重要载体,可以减少自由铁离子、氧自由基和过氧化氢的毒性;亚硒酸钠中的硒(Selenium),是谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)及其它一些重要酶的辅助因子,同时在培养基中起抗氧化的作用;孕酮对细胞有生长刺激作用;腐胺作为一种非蛋白质含氮碱,是多胺、亚精胺和精胺的前体,是细胞分裂过程中所必须的一类生长因子。
本产品经严格的质量控制和过滤除菌处理,可直接添加到类器官基础培养基中(JFKR-F16-500)配置相关类器官培养基。
使用说明
N-2 Supplement (100X)为100X浓度,置于4℃解冻本产品。使用前请用基础培养基稀释到1X。如准备500mL培养基:将5mL的B27 Supplement (50X, Serum-free)加入到495mL的基础培养基(JFKR-F16-500)中。配置好的培养基,2~8℃避光保存3个月。
以肠癌类器官培养基配置为参考:在500ml类器官基础培养基F16中添加:N2(JFKR-N2-5ml) 、B27(JFKR-B27-10ml)、R-spondin1(JFKR-RP01-100ug)、Noggin(JFKR-RP06-100ug)、EGF(JFKR-RP03-100ug)、FGF10(JFKR-RP04-100ug)、Glutamax、P/S、HEPES、N-Acetylcysteine、Nicotinamide、A8301、Gastrin、SB202190、Y27632,即可直接用于肠癌类器官培养。
产品优势
Ø 专门开发用于类器官培养的基础培养基,符合GMP规定生产,工艺稳定,批次效益小。
原料均选用自产或者经过严格检测和纯化的低内毒素高纯药用级别原料,热原水平低,减少外源内毒素干扰。
1,什么是类器官
类器官(Organoids)是器官特异性细胞类型的3D细胞集合,这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来,并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点
2,类器官的优点?
3,类器官原代遇到的问题?
4,在没有新鲜组织的情况下,可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗?
答:文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养,成功率较低,特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高,不建议组织冻存后进行类器官培养。
5,类器官培养过程中,提取原代细胞后,红细胞需要去除吗?
答:肿瘤组织中本身含有(如:肝,肺等组织)大量红细胞。首先,可以在拿到组织后尽量多清洗几次,能够去除大部分的红细胞;其次,可以使用商品化的红细胞裂解液,也可以不做红细胞处理。
6,类器官冻存的时间和代数选取?
答:类器官冻存建议体积控制在200μm以内,冻存可以选择P2代以后的代数。
7,类器官最快多久可以构建成功?
答:肠道类器官生长速度较快,1-2h可以观察到类器官形态。
8,目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官?
答:目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态;结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。
9,类器官和肿瘤球有什么区别?
答:类器官包含多种不同类型的细胞,可以在体外自我分化自我组装,具有干性可以进行传代;肿瘤球为单一细胞系通过外=外界物理条件成球,且肿瘤球在后期培养过程中,中间部位会因氧气,营养不足而出现部分死亡。
10,如何避免原代培养中的污染问题?
答:动物源性的样本一般比人源的更容易污染,尤其是一些胃肠、泌尿系统,培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素,实验室常用抗真菌试剂。