细胞骨架主要由微丝、微管和中间丝所组成,微丝主要是肌动蛋白组成,分为成肌动蛋白和纤维状蛋白单体。鬼笔环肽是一种双环七肽,是从鬼笔鹅膏中分离出来的。可以结合纤维状肌动蛋白,从而可以通过染色显示微丝在细胞中的分布,因此鬼笔环肽荧光染液在生物研究中被广泛使用。
在各种植物细胞或动物细胞中,标记的鬼笔环肽对大、小细丝具有相似的亲和力,平均每个肌动蛋白亚基结合一个鬼笔环肽分子。不同于抗体,鬼笔环肽与肌动蛋白的结合亲和力在不同物种间没有显著变化。
✨为什么选择鬼笔环肽?
精准锁定:特异性结合F-肌动蛋白,不与G-肌动蛋白"纠缠"
信号MAX:40倍荧光强度提升,背景噪音一键消除
懒人福音:免去抗体孵育烦恼,30分钟极速染色
全能选手:冰冻/石蜡切片、活细胞、类器官通吃
彩虹战队:488/555/594 三色荧光标记可选
产品信息:
cat. |
product name |
size |
NR21004 |
Phalloidin-488 dye Reagent |
100T |
NR21005 |
Phalloidin-555 dye Reagent |
100T |
NR21006 |
Phalloidin-594 dye Reagent |
100T |
实验流程极简版: 固定细胞→透化处理→鬼笔环肽染色→封片观察
实验流程详细步骤:
1、培养好的细胞爬片,轻轻吸去培养液,PBS 缓冲液清洗细胞3 次;
2、4%多聚甲醛固定液室温固定 15-30 min;
注意:甲醇能破坏肌动蛋白,因此固定液中不得含有甲醇,避免使用含甲醇的甲醛溶液;
3、PBS 清洗细胞 3 次,每次 5 min;
4、滴加含 0.1% Triton X-100 的 PBS 覆盖细胞,室温透化细胞20 min;
5、PBS 清洗细胞 3 次,每次 5 min;
6、用组化笔画在爬片周围画圈。取适量现配的鬼笔环肽染色工作液(1xPBS 按1:50-1:200的比例稀释)完全覆盖细胞,室温避光孵育 30-120 min。
注意:染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发,可将盖玻片放于密封容器内,此外,鬼笔环肽染色工作液中加入 1% BSA 可有效降低背景;
7、PBS 清洗细胞 3 次,每次 5 min;
8、向爬片上滴加即用型 DAPI 染色液覆盖细胞,室温染核 5-10 min;PBS 清洗细胞3次,每次 1min(选做);
9、滴加抗荧光淬灭封片剂封片;
10、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。