1，在常规开展传统免疫荧光实验的过程中，为何推荐使用TSA方法？
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技术 |
免疫组化 |
传统免疫荧光 |
TSA多重免疫荧光 |
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显色方法 |
DAB单染 DAB+红色色原双染 |
一抗二抗混合染色 |
多轮重复荧光实验 |
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一抗种类 |
适用于IHC |
多指标一抗种属需不同 |
多指标一抗种属不限 |
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二抗种类 |
HRP标记的二抗 |
不同荧光素标记的不同种属的二抗 |
HRP标记的二抗 |
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染色效果 |
只能最多同时染两个指标； 双染不能观察共表达情况，两个指标需要定位不同； 双染时不能单通道观察指标 |
检测灵敏度低 容易淬灭 同时标记蛋白数量少 |
检测灵敏度高，成倍提高荧光信号 抗淬灭性强 同时标记多种蛋白（最多7-10种） |
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检测成本 |
如需要染多个指标，需要多切很多张切片，不适用于珍贵或样本量少的样本 |
抗体种属需不同，选择范围少 混合染色不利于摸索实验条件，增加实验成本 |
抗体种属不限，选择范围广 多轮染色预实验可随时调整实验条件 |
2，传统荧光染色和TSA多重免疫荧光能否搭配使用？
可以，但建议将传统荧光染色安排在最后一轮进行。这是由于TSA法在抗体洗脱过程中，会同时洗脱一抗和二抗的结合物。
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