1, 染好的片子保存时间？

我司实验室的染色玻片在4℃条件下通常可保存6至12个月。

2,能否使用冰冻漂片进行TSA实验？

TSA试剂盒不适用于漂片

1.漂片厚度太厚，不利于试剂的渗透；

2.漂片在染色过程中形态会发生改变，如卷曲，褶皱等

3，样本为小鼠，是否可以选择小鼠来源的一抗？

通常不建议采取这种方式，因为如果一抗来源于小鼠，那么二抗也需使用抗小鼠的二抗，这可能会与样本中本身存在的IgG发生交叉反应，从而导致非特异性结合。

若必须使用与样本同种属来源的一抗，建议进行阴性对照实验，即在未添加一抗的情况下，仅加入二抗，以检测是否会产生非特异性信号。

4，传统荧光染色和TSA多重免疫荧光能否搭配使用？

可以，但建议将传统荧光染色安排在最后一轮进行。这是由于TSA法在抗体洗脱过程中，会同时洗脱一抗和二抗的结合物。

5，如何选择封闭液？

常用的封闭液包括牛血清和山羊血清，建议选择与二抗宿主种属相匹配的血清。

我司的plus版试剂盒中提供的抗体稀释液含有多种保护剂和防腐剂，也可以用于封闭。

6，试剂盒操作需要避光吗？

我司试剂盒的荧光染料具有优异的抗淬灭性能，因此无需在日光灯下进行避光操作，使用过程中也无需在暗环境中进行。不过，请注意避免试剂盒暴露在太阳光下直射。

7，多标实验中抗体的选择顺序有何讲究？

根据我们实验室的经验，推荐以下策略：

1、优先特异性差的、其次特异性好的开始预实验。

2、根据预实验结果，需要调整顺序，难以洗脱的抗体，摆在最后一轮；

3、比较难做的指标放在前面几轮做（比如 foxp3）

4、兔鼠一抗交叉做    

5、修复/洗脱方式是需要根据一抗调整条件的

第一轮通常做适合 EDTA 9.0 修复的指标；根据我司经验，第一轮通常采用 EDTA 9.0/高压 6.0  第二轮及以后通常采用 6.0 ，多抗建议 6.0  。

8，非特异性产生与改善方法？

1.抗体是多克隆的，容易产生非特异，可以换用单克隆抗体或者降低浓度以及修复强度来改善；

2.信号放大过强，可以降低染液反应时间或者浓度；

3.一抗浓度过高或者修复过度，采用比较低的稀释抗体比例，或降低修复强度（温度或者时间或者修复液 PH）

9，为什么会串色？

串色与多种因素有关系：

1. 可能与成像设备滤光片带宽有关系，尽量选用窄波长带宽的滤光片；

2. 可能与上一轮抗体未被完全洗脱关系，对于一些亲和力比较高的抗体比如CK等，抗体洗脱条件需要延长（提高洗脱温度时间等）；

3. 可能与信号不平衡有关系，比如相邻两个通道染料，一个强度过高，一个过低，导致强的信号发生外溢；

4. 其他可能存在的原因，比如抗体弄混，下一轮抗体忘记洗脱/修复等。

晗澄生物提供一站式mIHC多重免疫荧光解决方案，欢迎联系我们…

试剂盒产品链接：http://www.neorise.cn/products/454/

上海晗澄生物科技有限公司

微信：15502157206

公众号：晗澄生物