人正常肺类器官试剂盒产品信息：
操作步骤：
1、 原代
(1) 取材后的人正常肺组织须在 2 - 8℃含取出，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。
(2) 准备若干培养皿，加入 4℃预冷的原代培养缓冲液 B 备用
(3) 取样瓶消毒，将组织放入培养皿中，利用原代培养缓冲液 B 清洗三次后，去除杂质，利用眼科剪或手术刀将人正常肺组织粘膜去除，剪切成体积约为 1~3 mm3 的组织块。
(4) 组织用人正常肺原代组织消化液 C 消化，37℃震荡消化 15-20min，（消化过程中随时观察消化情况）。
(5) 取少量液体在显微镜下观察，镜下观察到较多的单个细胞或 70μ m 以下的细胞簇后，加入三倍体积原代培养缓冲液 B 终止消化。
(6) 使用 100μm 孔径的筛网进行过滤，将滤液收集后，于 300g 富集离心 5min 后移去上清，添加原代培养缓冲液 B 重新重悬离心。
(7) 基质胶计算：第 6 步后观察收集到的组织体积，添加 25 倍组织体积的基质胶重悬铺板。
(8) 24 孔细胞培养板为例，每孔点胶 25ul 组织基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。
(9) 将铺好的培养板放入 37℃培养箱中 10-15min 成胶，添加人正常肺类器官培养基 A（恢复室温）进行培养。
2、 类器官传代培养
(1) 移液器吸去培养基，每孔添加 1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液 G 放置 2min。
(2) 移液抢轻柔吹打基质胶，收集在 15ml 离心管中，4℃静置 10min。（每 6-8 孔为一组）
(3) :
3.1 类器官数量不足或体积较小时： 离心 5min 弃去上清，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 重悬移入 1.5ml 离心管，300g 离心 5min 弃去液体进行第 4 步。
3.2 类器官数量较多或体积较大时：离心 5min 弃去上清，添加适量类器官传代消化液 D消化 2-3min，添加类器官传代培养缓冲液 G 终止消化，离心 5min 弃去混合液，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 重悬移入 1.5ml 离心管，300g 离心 5min 弃去液体进行第 4 步。
(4) 类器官收集后，添加基质胶重悬，每孔 25μl 基质胶铺在 24 孔细胞培养板中，放置培养箱中 10-15min 添加 500μl 人正常肺类器官培养基 A。
3、 类器官冻存
(1) 移液器吸去培养基，每孔添加 1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液 G 放置 2min。
(2) 移液抢轻柔吹打基质胶，收集在 15ml 离心管中，4℃静置 10min。（每 6-8 孔为一组）
(3) 离心 5min 弃去上清，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 再次重悬，300g 离心 5min弃去液体。
(4) 添加适量类器官冻存液 F，轻柔吹打重悬，以 24 孔细胞培养板为例：密度为 2 个孔冻存 1 管，每管体积 1.4ml。
(5) 做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存，
4、 类器官复苏
(1) 取 10ml 类器官传代培养缓冲液 G 于 15ml 离心管中
(2) 从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。
(3) 水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2 分钟内完全融解。
(4) 将溶解后的类器官细胞快速转移至 15ml 离心管，使用移液管轻轻吹打 6-8 次，300g 离心 5 分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官传代培养缓冲液G 重悬移入 1.5ml 离心管 300g 离心 5min。
(5) 基质胶重悬，每孔 25μl 基质胶铺在 24 孔细胞培养板中，放置培养箱中 10-15min 成胶，添加 500μl 人正常肺类器官培养基 A。
捷方凯瑞平台可提供类器官培养基试剂盒清单:
捷方凯瑞平台类器官一站式服务
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