在构建肠、胃类器官时,对组织的消化解离过程需更为精细,以确保干细胞微环境的完整性和基质成分的有效保留。通常,应采用较低浓度的消化酶组合,如胶原酶与蛋白酶的协同作用,并适当缩短消化时间,以防止过度解离破坏干细胞的巢结构。此外,类器官培养要求更高的无菌操作标准,以避免微生物污染影响类器官的发育及长期传代稳定性。
对于胃类器官,需特别注意胃腺区域的识别与分离,确保主细胞与壁细胞的比例稳定;而肠类器官则需关注隐窝结构的完整性,因其富含肠道干细胞。
在类器官构建过程中,组织解离后的细胞悬液需迅速转入特定基质胶中进行培养,以模拟体内微环境并促进类器官三维结构的形成。同时,培养基中需补充特定的生长因子和信号通路调节剂,以维持干细胞的自我更新能力和定向分化潜能。
捷方凯瑞的正常肠/正常胃原代组织消化液能够快速且高效地将组织样本解离成细胞悬液或细胞团块,适用于类器官的构建。该消化液适用于正常人/鼠等正常肠、胃组织标本在体外原代培养过程中的消化解离。
组织样本的消化操作步骤:
(1) 取材后的组织建议在 2 - 8℃条件下保存,快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离,拍照并登记信息。
(2) 准备若干培养皿,加入 4℃预冷的原代缓冲液(或PBS)备用。
(3) 取样管消毒,将组织放入培养皿中,原代缓冲液(或PBS)清洗三次后,去除杂质,眼科剪或手术刀将组织剪切成体积约为 1~3 mm3 的组织块。(建议放入1.5ml EP管剪碎组织)
(4) 剪碎后的组织块加入5ml肠/胃原代组织消化液4℃震荡消化15-25 min(消化过程中随时观察组织消化情况)。
注:组织量太少或活检样本用 1ml 原代组织消化液 在 1.5ml EP 管内消化。
(5) 取少量消化液在显微镜下观察,镜下观察到较多的70μm以下的细胞簇或单个细胞后(图1-2),加入3倍体积原代缓冲液(或PBS)终止消化。

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