货号: JFKR-CZXHY-100/JFKR-CZXHY-500
产品介绍
正常肠/正常胃原代组织消化液可快速，高效的将组织样本解离为细胞悬液或细胞团块， 用于类器官的构建。 该组织消化液适用正常人/鼠等正常肠、胃组织标本在体外原代培养的消化解离。
试剂到货处理：
正常肠/正常胃组织消化液内含有维持细胞活性营养成分，和多种生物酶组成的混合物，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。
组织样本的消化
(1) 取材后的组织建议在 2 - 8℃条件下保存，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。
(2) 准备若干培养皿，加入 4℃预冷的原代缓冲液（或PBS）备用。
(3) 取样管消毒，将组织放入培养皿中，原代缓冲液（或PBS）清洗三次后，去除杂质，眼科剪或手术刀将组织剪切成体积约为 1~3 mm3 的组织块。（建议放入1.5ml EP管剪碎组织）
(4) 剪碎后的组织块加入5ml肠/胃原代组织消化液4℃震荡消化15-25 min（消化过程中随时观察组织消化情况）。
注：组织量太少或活检样本用 1ml 原代组织消化液 在 1.5ml EP 管内消化。
(5) 取少量消化液在显微镜下观察，镜下观察到较多的70μm以下的细胞簇或单个细胞后（图1-2），加入3倍体积原代缓冲液（或PBS）终止消化。
1，什么是类器官
类器官（Organoids）是器官特异性细胞类型的3D细胞集合，这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来，并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点
2，类器官的优点？
3，类器官原代遇到的问题？
4，在没有新鲜组织的情况下，可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗？
答：文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养，成功率较低，特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高，不建议组织冻存后进行类器官培养。
5，类器官培养过程中，提取原代细胞后，红细胞需要去除吗？
答：肿瘤组织中本身含有（如：肝，肺等组织）大量红细胞。首先，可以在拿到组织后尽量多清洗几次，能够去除大部分的红细胞；其次，可以使用商品化的红细胞裂解液，也可以不做红细胞处理。
6，类器官冻存的时间和代数选取？
答：类器官冻存建议体积控制在200μm以内，冻存可以选择P2代以后的代数。
7，类器官最快多久可以构建成功？
答：肠道类器官生长速度较快，1-2h可以观察到类器官形态。
8，目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官？
答：目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态；结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。
9，类器官和肿瘤球有什么区别？
答：类器官包含多种不同类型的细胞，可以在体外自我分化自我组装，具有干性可以进行传代；肿瘤球为单一细胞系通过外=外界物理条件成球，且肿瘤球在后期培养过程中，中间部位会因氧气，营养不足而出现部分死亡。
10，如何避免原代培养中的污染问题？
答：动物源性的样本一般比人源的更容易污染，尤其是一些胃肠、泌尿系统，培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素，实验室常用抗真菌试剂。
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