多重荧光免疫组化(mIHC，Multiplex Immunohistochemistry）是一种能够在单张切片上同时检测多种蛋白质标志物的技术。与传统免疫组化（IHC）通常只能检测1~2个靶标不同，mIHC 能对6~8种甚至更多目标蛋白进行可视化和空间定位分析。

通过mIHC技术在组织层面同时进行多个指标的染色成像，可以深入探究非小细胞肺癌（NSCLC）组织内的细胞异质性，揭示肿瘤微环境的复杂构成；精确刻画细胞间的相互作用网络，阐明免疫反应的动态过程；并对复杂的免疫结构进行高分辨率分析，如三级淋巴结构（TLS）的精细结构和功能。

本期小编就给大家分享几篇在非小细胞肺癌领域的研究中，多重荧光免疫组化助力科研人员取得的高分文章！

案例一：

• 文章标题：A single-cell atlas reveals immune heterogeneity in anti-PD-1-treated non-small cell lung cancer
• 发表期刊：Cell
• 影响因子：42.5
• 研究方向：非小细胞肺癌
• mIHC Panel: CD68，PanCK，FOXP3，CTLA4

全文总结：首次在大样本队列中明确 NSCLC 患者 chemo-immunotherapy 后存在 5 种具有不同 MPR 率的 TIME 亚型，其免疫细胞组成差异是治疗响应异质性的核心原因。FGFBP2+ NK/NK 样 T 细胞、成熟 TLS 结构、效应 T 细胞与高 MPR 率相关，而 CCR8+ Treg 富集与治疗抵抗密切相关。非 MPR 患者具有显著免疫异质性，可基于 CCR8+ Treg 克隆扩增水平分为 Treghi 和 Treglow 亚群，两者复发风险差异显著。前体耗竭 T 细胞（Texp 细胞）在 Tex 相关细胞中的比例是无复发生存期的独立预测指标，其预测准确性优于传统病理响应率，为 NSCLC 患者的精准分层和治疗优化提供了关键生物标志物。

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案例二：

• 文章标题：Single-cell and spatial transcriptomic analyses revealing tumor microenvironment remodeling after neoadjuvant chemoimmunotherapy in non-small cell lung cancer
• 发表期刊：Molecular Cancer
• 影响因子：27.7
• 研究方向：非小细胞肺癌
• mIHC Panel: CD68，PanCK，CXCL9，SPP1

全文总结：基于空间转录组学的细胞间通讯分析表明，在非小细胞肺癌治疗有效患者中，SELENOP+巨噬细胞、apCAF以及CD4+和CD8+ T细胞之间的相互作用显著增强。此外，在联合治疗过程中，SELENOP+巨噬细胞通过胆固醇代谢、白细胞介素、趋化因子及HLA等途径，募集了CD4+初始T细胞、辅助性T细胞以及CD8+初始T细胞。本研究进一步揭示了非小细胞肺癌在联合治疗过程中，肿瘤微环境所发生的动态空间变化及转录特征改变。

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案例三：

• 文章标题：Multiplexed imaging of tumor immune microenvironmental markers in locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer characterizes the features of response to PD-1 blockade plus chemotherapy
• 发表期刊：Cancer Communications
• 影响因子：24.9
• 研究方向：非小细胞肺癌
• mIHC Panel: PD-L1，CD8，CD68，CD4，FOXP3

全文总结:本文收集了144例无驱动基因变异的局部晚期或转移性NSCLC患者的基线肿瘤组织样本，通过多重免疫荧光（mIHC）检测技术，评估了肿瘤免疫微环境标志物，包括PD-1配体（PD-L1）、CD8、CD68、CD4以及FoxP3的表达情况。利用Kaplan-Meier曲线分析了不同标志物表达状态下的治疗预后差异，并比较了这些标志物（及其组合）表达水平不同的肿瘤在突变谱上的差异。发现肿瘤免疫微环境标志物的表达（尤其是 CD8/PD‐L1 或 CD68/PD‐L1 的共表达）与晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者接受 PD‐1 阻断联合化疗作为一线治疗的疗效相关。

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参考文献&来源：

[1] A single-cell atlas reveals immune heterogeneity in anti-PD-1-treated non-small cell lung cancer. Cell. 2025 May 29;188(11):3081-3096.e19. doi: 10.1016/j.cell.2025.03.018. Epub 2025 Mar 26. PMID: 40147443.

[2] Single-cell and spatial transcriptomic analyses revealing tumor microenvironment remodeling after neoadjuvant chemoimmunotherapy in non-small cell lung cancer. Mol Cancer. 2025 Apr 9;24(1):111. doi: 10.1186/s12943-025-02287-w. PMID: 40205583; PMCID: PMC11980172.

[3] Multiplexed imaging of tumor immune microenvironmental markers in locally advanced or metastatic non-small-cell lung cancer characterizes the features of response to PD-1 blockade plus chemotherapy. Cancer Commun (Lond). 2022 Dec;42(12):1331-1346. doi: 10.1002/cac2.12383. Epub 2022 Nov 4. PMID: 36331328; PMCID: PMC9759770.

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