多重荧光免疫组化(mIHC，Multiplex Immunohistochemistry）是一种能够在单张切片上同时检测多种蛋白质标志物的技术。与传统免疫组化（IHC）通常只能检测1~2个靶标不同，mIHC 能对6~8种甚至更多目标蛋白进行可视化和空间定位分析。

通过mIHC技术在组织层面同时进行多个指标的染色成像，可以深入探究非小细胞肺癌（NSCLC）组织内的细胞异质性，揭示肿瘤微环境的复杂构成；精确刻画细胞间的相互作用网络，阐明免疫反应的动态过程；并对复杂的免疫结构进行高分辨率分析，如三级淋巴结构（TLS）的精细结构和功能。

本期小编就给大家分享几篇在非小细胞肺癌领域的研究中，多重荧光免疫组化助力科研人员取得的高分文章！

案例四：

文章标题：Metabolic characterization of tumor-immune interactions by multiplexed immunofluorescence reveals spatial mechanisms of immunotherapy response in non-small cell lung carcinoma (NSCLC)

发表期刊：Nature Communications

影响因子：18.1

研究方向：非小细胞肺癌

mIHC Panel: CD45, CD3e, CD8, CD4, CD20, CD14, CD68, CD31, CD34, PD-L1, PD-1，Ki67，PanCK

全文总结：免疫检查点抑制剂（ICI）虽然改善了部分晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的临床结局，但仍有70-80%的患者存在原发性或获得性耐药，这是临床面临的主要挑战。当前对耐药机制的理解多集中于经典免疫学范畴，而对肿瘤微环境（TME）中细胞的空间排列及其功能状态，尤其是代谢状态的交互作用知之甚少。为此，研究团队在《自然·通讯》发表研究，旨在通过多重免疫荧光（mIHC）与深度学习技术，解析治疗前活检组织中TME的细胞表型、功能与代谢的空间特征，以发现预测ICI疗效的生物标志物。

案例五：

文章标题：Spatial single-cell proteotyping reveals immunotherapy-resistant features within the complex tumor microenvironment of metastatic NSCLC

发表期刊：The Journal of Clinical Investigation

影响因子：13.6

研究方向：非小细胞肺癌

mIHC Panel: Pan-CK，Ki-67，CD45，CD3，CD8，CD4 ，FoxP3，FAP，CD68 ，CD39，CD163，CD73，CD103

全文总结:针对103例非小细胞肺癌mNSCLC患者（其中81例接受了ICI治疗），本文章利用专为深入解析TME而构建的29种标记物的多重免疫组化（mIHC）技术平台，对治疗前的肿瘤组织进行单细胞空间分析，阐明了mNSCLC患者在接受ICI治疗过程中，异质性免疫细胞亚群的临床意义，为开发针对性的治疗策略提供了参考。

案例六：

文章标题：Immune cellular patterns of distribution affect outcomes of patients with non-small cell lung cancer.

发表期刊：Nature Communications

影响因子：15.7

研究方向：非小细胞肺癌

mIHC Panel: cytokeratin (CK)，CD3，CD8，PD-1，PD-L1，CD68，ICOS，LAG3，OX40，TIM3，CD20

全文总结：这项研究首先通过多套mIHC Panel检测免疫细胞及相关功能Marker表达，进一步完成肿瘤细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞等细胞类型的分类，并分析不同免疫细胞表型及共表达特征。进一步地引入空间邻近分析、最近邻距离分析以及 mixed/unmixed 空间分布模式评估，揭示免疫细胞与肿瘤细胞之间的空间组织关系。最后，结合OS/RFS等临床预后信息，评估不同空间分布模式与患者预后的相关性，从而构建出肿瘤免疫微环境中细胞空间分布特征与临床结局之间的关联框架。

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参考文献&来源：

[1] Metabolic characterization of tumor-immune interactions by multiplexed immunofluorescence reveals spatial mechanisms of immunotherapy response in non-small cell lung carcinoma (NSCLC). Nat Commun. 2026 Feb 3;17(1):837. doi: 10.1038/s41467-026-68633-8. PMID: 41634004; PMCID: PMC12868679.

[2] Spatial single-cell proteotyping reveals immunotherapy-resistant features within the complex tumor microenvironment of metastatic NSCLC. J Clin Invest. 2026 Mar 10;136(10):e195021. doi: 10.1172/JCI195021. PMID: 41805727; PMCID: PMC13178657.

[3] Immune cellular patterns of distribution affect outcomes of patients with non-small cell lung cancer. Nat Commun. 2023 Apr 25;14(1):2364. doi: 10.1038/s41467-023-37905-y. PMID: 37185575; PMCID: PMC10130161.

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