酪酰胺信号放大(TSA ，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶 蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的 DAB 显色方法 ，TSA 技术同样采用 HRP 标记的二抗，同样有对应的“显色 ”步骤（HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底 物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法或者抗体 洗脱液洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP 复合物，重复下一种一抗- HRP二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧 光素底物，如此往复就可实现多重标记。主要用于免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）或原位杂交（ISH）等实验中。
试剂盒组分包含:
Nova TYRplus 荧光染料, TSA buffer, 多聚HRP标记二抗, DAPI染液, 抗体稀释液, 3%双氧水, 抗荧光淬灭封片剂（干固型）。
本试剂盒适用于人和小鼠的样本。
详细的信息和操作步骤详见datasheet。
试剂盒实验流程（石蜡切片TSA染色流程）：
试剂盒储存温度：4℃保存，一年有效期，
试剂盒组分请参考说明书里面组分保存要求，详细操作步骤请参考说明书。
注意事项：
1、如样本是石蜡切片或冰冻切片，应选择适用于IHC的一抗；
2、如样本是细胞爬片，应选择适用于ICC/IF的一抗。
3、如果样本是细胞爬片，请搭配我司抗体洗脱液一起使用。
1, 染好的片子保存时间？
我司实验室的染色玻片在4℃条件下通常可保存6至12个月。
2,能否使用冰冻漂片进行TSA实验？
TSA试剂盒不适用于漂片
1.漂片厚度太厚，不利于试剂的渗透；
2.漂片在染色过程中形态会发生改变，如卷曲，褶皱等
3，样本为小鼠，是否可以选择小鼠来源的一抗？
通常不建议采取这种方式，因为如果一抗来源于小鼠，那么二抗也需使用抗小鼠的二抗，这可能会与样本中本身存在的IgG发生交叉反应，从而导致非特异性结合。
若必须使用与样本同种属来源的一抗，建议进行阴性对照实验，即在未添加一抗的情况下，仅加入二抗，以检测是否会产生非特异性信号。
4，传统荧光染色和TSA多重免疫荧光能否搭配使用？
可以，但建议将传统荧光染色安排在最后一轮进行。这是由于TSA法在抗体洗脱过程中，会同时洗脱一抗和二抗的结合物。
5，如何选择封闭液？
常用的封闭液包括牛血清和山羊血清，建议选择与二抗宿主种属相匹配的血清。
我司的plus版试剂盒中提供的抗体稀释液含有多种保护剂和防腐剂，也可以用于封闭。
6，试剂盒操作需要避光吗？
我司试剂盒的荧光染料具有优异的抗淬灭性能，因此无需在日光灯下进行避光操作，使用过程中也无需在暗环境中进行。不过，请注意避免试剂盒暴露在太阳光下直射。
7，多标实验中抗体的选择顺序有何讲究？
根据我们实验室的经验，推荐以下策略：
1、优先特异性差的、其次特异性好的开始预实验。
2、根据预实验结果，需要调整顺序，难以洗脱的抗体，摆在最后一轮；
3、比较难做的指标放在前面几轮做（比如 foxp3）
4、兔鼠一抗交叉做
5、修复/洗脱方式是需要根据一抗调整条件的
第一轮通常做适合 EDTA 9.0 修复的指标；根据我司经验，第一轮通常采用 EDTA 9.0/高压 6.0 第二轮及以后通常采用 6.0 ，多抗建议 6.0 。
8，非特异性产生与改善方法？
1.抗体是多克隆的，容易产生非特异，可以换用单克隆抗体或者降低浓度以及修复强度来改善；
2.信号放大过强，可以降低染液反应时间或者浓度；
3.一抗浓度过高或者修复过度，采用比较低的稀释抗体比例，或降低修复强度（温度或者时间或者修复液 PH）
9，为什么会串色？
串色与多种因素有关系：
1. 可能与成像设备滤光片带宽有关系，尽量选用窄波长带宽的滤光片；
2. 可能与上一轮抗体未被完全洗脱关系，对于一些亲和力比较高的抗体比如CK等，抗体洗脱条件需要延长（提高洗脱温度时间等）；
3. 可能与信号不平衡有关系，比如相邻两个通道染料，一个强度过高，一个过低，导致强的信号发生外溢；
4. 其他可能存在的原因，比如抗体弄混，下一轮抗体忘记洗脱/修复等。
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