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ATP发光法类器官活力检测试剂盒 品牌：上海捷方凯瑞生物，对应货号：JFKR-ATP -10/JFKR-ATP -100
产品简介
ATP 生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷(ATP)和 O2 为底物，在 Mg2+ 存在时，能将化学能转化为光能。ATP 既是荧光素酶催化发光的必需底物，又是所有生物生 命活动的能量来源。在荧光素酶催化的发光反应中，ATP 在一定的浓度范围内，其浓度与发 光强度呈线性关系。
本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，利用 Firefly luciferase(萤火虫荧光素酶)催化 底物—— 荧光素的转化，高效利用 ATP 的能量，发射出光子。发光信号与存在的 ATP 量呈正比，而 ATP 与存在于培养基中的细胞数目直接呈正比。
本试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS) ，类器官或细胞增殖和毒性分析的理 想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入类器官或细胞培养液中，无需去胶，洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。
均质检测的"加样-混合-检测" 的操作方案使得类器官或细胞裂解和产生的发光信号与存在的 ATP 量成正比，而 ATP 量直接与培养物中的细胞数量成正比。独特的均质检测方案避免了那些 需要多个步骤的 ATP 检测方法可能会引入的误差。
CellTiter-JFKR-Organoid 发光法类器官活力检测试剂盒产品特点：
1) 简化了细胞活性检测步骤：均质的"加样-混合-检测"方案减少了其它同类检测所需的操作步骤。
2) 类器官或细胞用量更少：可准确地检测到低于常用的比色法和荧光法的检测低限的类器官或细胞数。 减少了每个检测反应所需的类器官或细胞数。
3) 迅速获得结果：加入试剂后 10 分钟就能获得数据。
4) 可自行选择检测方案：可用于多种类型的多孔板操作。可用发光检测仪或 CCD 成 像设备记录数据。
5) 可连续处理培养板：发光信号稳定，样品可进行批量处理。
保存条件
溶解后尽快使用，-80度保存一个月。
注意事项
1 、荧光素酶的活性对温度比较敏感，所以反应前类器官或细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行 测定。检测试剂请混匀后使用。
2 、本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用 效果，第一次溶解后后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有 ATP 污染。
3 、待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通 过设置含有溶剂的类器官或细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。
4、检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
5、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。
6 、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1，什么是类器官
类器官（Organoids）是器官特异性细胞类型的3D细胞集合，这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来，并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点
2，类器官的优点？
3，类器官原代遇到的问题？
4，在没有新鲜组织的情况下，可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗？
答：文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养，成功率较低，特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高，不建议组织冻存后进行类器官培养。
5，类器官培养过程中，提取原代细胞后，红细胞需要去除吗？
答：肿瘤组织中本身含有（如：肝，肺等组织）大量红细胞。首先，可以在拿到组织后尽量多清洗几次，能够去除大部分的红细胞；其次，可以使用商品化的红细胞裂解液，也可以不做红细胞处理。
6，类器官冻存的时间和代数选取？
答：类器官冻存建议体积控制在200μm以内，冻存可以选择P2代以后的代数。
7，类器官最快多久可以构建成功？
答：肠道类器官生长速度较快，1-2h可以观察到类器官形态。
8，目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官？
答：目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态；结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。
9，类器官和肿瘤球有什么区别？
答：类器官包含多种不同类型的细胞，可以在体外自我分化自我组装，具有干性可以进行传代；肿瘤球为单一细胞系通过外=外界物理条件成球，且肿瘤球在后期培养过程中，中间部位会因氧气，营养不足而出现部分死亡。
10，如何避免原代培养中的污染问题？
答：动物源性的样本一般比人源的更容易污染，尤其是一些胃肠、泌尿系统，培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素，实验室常用抗真菌试剂。
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