《Distribution and density of tertiary lymphoid structures predict clinical outcome in intrahepatic cholangiocarcinoma》发表于Journal of Hepatology期刊，影响因子26.8，文章主要研究了三级淋巴结构（Tertiary Lymphoid Structures, TLSs）在肝内胆管癌（Intrahepatic Cholangiocarcinoma, iCCA）中的分布、密度及其对临床预后的影响。

研究背景

肝内胆管癌（iCCA）是仅次于肝细胞癌的第二大原发性肝脏恶性肿瘤，其发病率和死亡率呈上升趋势，且目前的治疗方法效果有限，术后复发率高。三级淋巴结构（TLSs）在多种实体瘤中与良好的预后和抗肿瘤免疫反应相关，但在iCCA中的作用尚不清楚。因此，本研究旨在全面评估TLSs在iCCA中的分布、密度和细胞组成，揭示其预后价值和功能作用，为iCCA的临床诊断和治疗提供新的依据。

实验部分

研究人员回顾性地纳入了来自中国3个癌症中心的962名患者，分为发现队列（Cohort D，371名患者）和3个验证队列（Cohort V1，300名患者；Cohort V2，180名患者；Cohort V3，111名患者）。通过对患者的病理切片进行扫描和分析，研究人员量化了不同解剖区域（肿瘤内、侵袭边缘和肿瘤周围）的TLSs，并通过Cox回归和Kaplan-Meier分析评估了TLSs与总生存期（OS）的相关性。

此外，研究人员还对39个iCCA样本进行了多重免疫组化（mIHC）分析，以表征TLSs的细胞组成。mIHC技术能够同时检测多种标记物，包括CD3、CD8、CD20、CD4、Foxp3和Bcl6等，从而揭示TLSs中不同免疫细胞的分布和功能状态。

A：展示了通过连续切片进行H&E染色和多重免疫组化（mIHC）染色的TLSs的空间对齐图。

B：展示了多重免疫组化染色的代表性图像，显示了肿瘤周围（peri-tumor）和肿瘤内（intra-tumor）TLSs中CD3（T细胞）、CD8（细胞毒性T细胞）、CD20（B细胞）、CD4（辅助性T细胞）、Foxp3（Treg）和Bcl6（Tfh）的表达情况。

C：比较了肿瘤周围和肿瘤内TLSs中CD4+Bcl6+ Tfh细胞和CD4+Foxp3+ Treg细胞的密度。

D：比较了肿瘤周围和肿瘤内TLSs中CD4+Bcl6+ Tfh细胞和CD4+Foxp3+ Treg细胞的频率。

E：展示了不同T score和P score的肿瘤内TLSs中Bcl6和Foxp3的染色情况。

F：比较了不同P score的TLSs中CD4+Bcl6+ Tfh细胞和CD4+Foxp3+ Treg细胞的频率。

G：比较了不同T score的TLSs中CD4+Bcl6+ Tfh细胞和CD4+Foxp3+ Treg细胞的频率。

通过多重免疫组化染色和定量分析，揭示了TLSs在肿瘤内和肿瘤周围的细胞组成差异，特别是Tfh细胞和Treg细胞的分布和频率。这些发现表明，TLSs在不同位置的功能状态存在显著差异，肿瘤内TLSs通常与更强的抗肿瘤免疫反应相关，而肿瘤周围TLSs可能与免疫抑制相关。

研究结论与意义

本研究通过全面评估三级淋巴结构（TLSs）在肝内胆管癌（iCCA）中的分布、密度和细胞组成，揭示了TLSs在iCCA中的预后价值和功能作用。研究发现，肿瘤内TLSs的数量（T score）与良好的预后呈正相关，而肿瘤周围TLSs的数量（P score）与不良预后相关。结合T score和P score，研究者将iCCA患者分为四个免疫亚类，其中免疫活跃型（Class IV）患者的生存率最高，而免疫排斥型（Class I）患者的生存率最低。此外，研究还发现肿瘤内TLSs中T滤泡辅助细胞（Tfh）和调节性T细胞（Treg）的密度和频率显著高于肿瘤周围TLSs，这表明TLSs在肿瘤内和肿瘤周围的功能状态存在显著差异。

图：不同免疫类别中三级淋巴结构（TLS）的分布模式和细胞组成

这些发现不仅为iCCA的预后评估提供了新的生物标志物，还为免疫治疗提供了新的靶点。通过增强肿瘤内TLSs的功能或抑制肿瘤周围TLSs的免疫抑制作用，可能提高免疫治疗的效果。此外，研究提出的免疫分类系统在多个独立队列中得到了验证，显示出比传统TNM分期系统更高的预后准确性，为未来的临床应用提供了重要的参考。总之，本研究为理解TLSs在肿瘤免疫中的作用提供了新的视角，并为iCCA的临床诊断和治疗提供了新的工具和思路。

参考文献：

Ding GY, Ma JQ, Yun JP, et al. Distribution and density of tertiary lymphoid structures predict clinical outcome in intrahepatic cholangiocarcinoma. J Hepatol. 2022;76(3):608-618. doi:10.1016/j.jhep.2021.10.030

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