软件：Qupath

图像格式：ome.tiff

电脑系统：windows

1、Qupath安装

l 直接双击安装包，点击next一步步往下安装即可：

2、运行Qupath

l 发送到桌面快捷方式                                                     

l 双击图标打开（打开界面后，弹出来的弹窗可以直接关闭）

3、创建项目

l 点击Creat project，选择储存项目文件的位置，新建一个文件夹更改文件夹名称，选择新建好的文件夹

4、图像导入

l 创建好项目后，image list出现项目文件夹名称，随后点击Add images                                                                           

 l 找到图片所在位置，直接拖入窗口 

l 选择图片格式，可以选择Default，让Qupath自己识别；随后选择图片类型，一般超多标都为荧光图，可选择Fluorescence；最后点击Import

l 导入读条结束后，列表可看见图像名称，双击打开即可在右边窗口看见图像

5、通道伪彩调整

l 点击对比度调整图标，打开通道调整窗口

l 勾选对应的通道（注意：超多标的图每轮都会扫DAPI，可以只勾选一个DAPI通道即可）；双击通道可以进行命名和伪彩更改，以区分相同染料对应的不同指标。

l 荧光亮度与背景调整：选中需要调整的通道，调整下方的Channel max（往左拉亮度增加），Channel min（往右拉背景降低）。

（注意：调整单个通道伪彩亮度时，建议可以只打开当前通道和dapi通道，便于观察效果）

l 叠好的图像初始导入伪彩亮度很高，发现Channel max的最大值并非255，不好调整。可双击该数值，在跳出的框中直接输入255，让每个通道都先回归最原始的亮度，再进行调整。

6、其他常用功能

l 添加标注

l 图像截图、导出

Qupath为开源定量分析软件，本操作手册未列出，可通过浏览器搜索其他操作攻略

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