类器官冻存液

产品信息

类器官冻存液，品牌：上海捷方凯瑞，产品货号：货号:JFKR-DCY-50/JFKR-DCY-100

类器官冻存液Organoid Cryopreservation Medium可应用于多种哺乳动物（如人、鼠）来源的类器官和细胞系的低温长期保存。

类器官（细胞）的冻存

向回收后的类器官（细胞）中加入预冷的（2-8℃）类器官冻存液，吹打混匀后迅速转移至细胞冻存管中（冻存管内细胞悬液体积应大于 0.5mL）。
注意：每 1mL 冻存液推荐冻存 1x103-1x107 个细胞或对应细胞量的类器官。
将冻存管放入细胞冻存降温盒内（降温盒须提前平衡至室温或 4℃），随后立即将降温盒放入-80 ℃超低温冰箱中；也可将冻存管进行人工梯度降温处理，如 4℃ 静置 10 分钟， -20℃保存 1 小时， -80℃保存过夜。
次日或 12 小时后将冻存管于低温条件下（不高于-70℃，推荐使用干冰或原降温盒）转移至液氮中长期保存

类器官（细胞）的复苏

取10ml类器官传代缓冲液（或PBS）于15ml离心管中
从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。
水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2 分钟内完全融解。
将溶解后的类器官快速转移至15ml 离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g 离心 5分钟，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官传代缓冲液（或PBS）重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。
按照离心类器官体积，20-25倍体积基质胶重悬，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min成胶，添加500-750μl类器官培养基。

运用范围:

For Laboratory Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.

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FAQ

1、类器官培养构建常见问题（一）收起

1，什么是类器官

类器官（Organoids）是器官特异性细胞类型的3D细胞集合，这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来，并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点

2，类器官的优点？

3，类器官原代遇到的问题？

4，在没有新鲜组织的情况下，可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗？

答：文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养，成功率较低，特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高，不建议组织冻存后进行类器官培养。

5，类器官培养过程中，提取原代细胞后，红细胞需要去除吗？

答：肿瘤组织中本身含有（如：肝，肺等组织）大量红细胞。首先，可以在拿到组织后尽量多清洗几次，能够去除大部分的红细胞；其次，可以使用商品化的红细胞裂解液，也可以不做红细胞处理。

6，类器官冻存的时间和代数选取？

答：类器官冻存建议体积控制在200μm以内，冻存可以选择P2代以后的代数。

7，类器官最快多久可以构建成功？

答：肠道类器官生长速度较快，1-2h可以观察到类器官形态。

8，目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官？

答：目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态；结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。

9，类器官和肿瘤球有什么区别？

答：类器官包含多种不同类型的细胞，可以在体外自我分化自我组装，具有干性可以进行传代；肿瘤球为单一细胞系通过外=外界物理条件成球，且肿瘤球在后期培养过程中，中间部位会因氧气，营养不足而出现部分死亡。

10，如何避免原代培养中的污染问题？

答：动物源性的样本一般比人源的更容易污染，尤其是一些胃肠、泌尿系统，培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素，实验室常用抗真菌试剂。

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