类器官（Organoids）是源自干细胞或肿瘤细胞的三维细胞培养模型，具备对应器官的细胞类型和空间结构，能模拟器官部分功能，在疾病研究、药物筛选和再生医学等领域具有重要应用。利用类器官病理研究，可在体外观察器官生长发育过程，替代传统动物模型，大幅缩短药物研发周期，降低研发成本，提升疾病治疗效率。通过类器官病理研究，科学家们能够更精准地探究疾病机理，加速新药筛选，减少动物实验依赖，推动个性化医疗发展。
类器官病理步骤参考：
一、类器官培养：
二、石蜡包埋实验步骤
2.1, 样本处理（琼脂糖包埋）：
1.取0.2到0.4克的琼脂糖粉末，加入10毫升的去离子水缓冲液中，加热至完全融化。将融化后的琼脂糖溶液取出0.2毫升至0.6毫升，转移至新离心管内。
2.取PCR管，将其插入离心管中，形成凹槽。
3.类器官进行离心处理，取其底部部分，然后加入到步骤2形成的凹槽中，加入的PBS缓冲液稍微覆盖过琼脂糖。
4.离心1000rpm，离心5min，去除上清液。重复两次。
5.离心完成后，向凹槽中加入适量的琼脂糖，填满凹槽，与类器官充分混匀。
6.待琼脂糖室温凝固后，取出琼脂块。
琼脂糖凹槽
2.2, 脱水
1.梯度乙醇进行脱水处理，依次使用70%、80%、90%和95%的乙醇各浸泡40分钟。
2.将样本放入无水乙醇中浸泡40分钟，之后再浸泡30分钟。
3.使用无水乙醇与二甲苯按1:1的比例混合的溶液浸泡样本30分钟。
4.将样本放入二甲苯中浸泡两次，每次30分钟。
5.完成上述步骤后，将样本放入60℃的蜡缸中进行浸蜡处理，每次30分钟，之后进行包埋。
2.3, 类器官包埋
1.将组织块（即琼脂糖块）放置在模具的中央位置。
2.将熔化的蜡液倒入模具中，确保蜡液完全覆盖模具，将模具放置在包埋盒中等待蜡液凝固。
2.4, 切片过程
1.将包埋好的蜡块体放入-10℃的冷冻环境中冷冻5分钟，将包埋块夹在样本夹。
2.调整刀座与包埋块的距离，先进行粗修，直至组织（琼脂块）露出大约80%。
3.继续进行细修，直至组织露出大约95%，或者在显微镜下观察到琼脂块中有 细胞为止。
4.将切好的切片放置在45℃的温水中展平，直到没有褶皱，使用玻片捞出。
5.根据组织和琼脂块的具体情况，适当调整切片的厚度。
6.将切片写上编号后，放入烤箱中在65℃的温度下烘烤2小时。
三、染色：
常规染色：如苏木精-伊红（H&E）染色，用于观察整体组织结构。
特殊染色：如PAS染色、Masson染色、铁染色等，用于特定组织成分的观察。
免疫组化染色：使用抗体检测特定蛋白的表达和定位。
3.1, HE染色步骤
3.1.1，脱蜡
1.脱蜡过程：将石蜡切片依次浸入3个二甲苯中，每个10min，以溶解石蜡。
2.水化过程：使用梯度酒精（从100%开始递减至70%），依次浸泡5min，最后用蒸馏水浸洗1min。
3.1.2，苏木精染色
1.染色过程：在切片上滴加苏木精染液，持续5min后，用流水冲洗，以去除多余的染液。
2.分化过程：使用分化液对切片进行分化处理，持续10秒后，再次用流水冲洗，去除多余的分化液。
3.返蓝过程：使用返蓝液对切片进行返蓝处理，持续10秒后，用流水冲洗，去除多余的返蓝液。
3.1.3，伊红染色
染色过程：在切片上滴加伊红染液，持续2min后，用流水冲洗，去除多余的伊红。
3.1.4，脱水与透明
1,脱水过程：使用梯度酒精（从70%开始递增至100%），每种浓度浸泡2分钟，确保彻底脱水。
2.透明过程：将切片放入2个二甲苯中，每个浸泡5min，使组织变得透明。
3.1.5，封片
封片过程：在组织上滴加适量的中性树胶，盖上盖玻片，避免产生气泡，自然晾干。
3.2，免疫荧光（IF/mIHC）实验步骤
参考我司官网染色步骤：
四、图像采集：
切片于成像平台采集图像。
五、图像分析：
通过图像分析软件进行定量分析和统计。
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