一、胰腺癌类器官连续生长图、连续生长曲线以及荧光鉴定相关信息:

图1 P3代胰腺癌类器官连续生长图

图2 P3代胰腺癌类器官连续生长曲线 图3 胰腺癌类器官荧光鉴定图片
二、胰腺癌类器官复苏步骤:
实验材料:传代缓冲液G、胰腺癌类器官培养基A、基质胶(提前24h放入4℃冰箱融化)、24孔细胞培养板、冰盒、15mL离心管、水浴锅、移液器。
■ 1.收到冻存类器官:放入-80冰箱12h后,转移至液氮中,12h后可进行类器官复苏复苏步骤如下:
从液氮中取出冻存的类器官,快速置于37℃水浴锅中融解,水浴融解过程中,需轻轻摇动冻存管,以确保冻存液在短时间内完全融解;
(1)在类器官融解过程中,向15mL离心管中提前加入10mL传代缓冲液备用;
(2)使用1mL移液器轻轻吸取冻存液,缓慢加入到准备好的缓冲液中,使用移液器轻柔吹打2-3次, 300g离心5min弃上清;
(3)再次向沉淀中加入约10mL传代缓冲液,使用移液器轻柔吹打2-3次(沉淀吹散即可),300g离心5min弃上清;
(4)使用200μL移液器小心吸取残留上清,添加200μL基质胶(通常的:复苏一管冻存类器官使用200μL基质胶,复苏2管冻存的类器官使用400μL基质胶)重悬(避免气泡产生),24孔细胞培养板按照25μL-30μL每孔点胶,基质胶全程维持在0-4℃条件下操作;
(5)细胞培养板放置37℃二氧化碳培养箱中10-15min,待基质胶凝固后,每孔添加750μL类器官培养基(常温)进行培养。
■ 2.收到活体类器官:
复苏步骤如下:
(1)300g离心5min,去除上清液保留类器官细胞沉淀;
(2)添加300μL基质胶,200μL移液器混匀,每孔添加30μL基质胶混合物至24孔细胞培养板中间;
(3)操作完毕,将细胞培养板转移至37℃二氧化碳培养箱,15min后,沿细胞板壁添加750μL培养基;
(4)操作完毕将细胞培养板转移至37℃二氧化碳培养箱培养观察。
三、胰腺癌类器官构建培养步骤:
四、胰腺癌类器官病理染色步骤:
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