DHE(Dihydroethidium)，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的 ROS 氧化，形成氧化乙锭；氧化乙锭可掺入染色体 DNA 中，产生红色荧光。
根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞 ROS 含量的多少和变化。DHE 在 细胞内主要被超氧阴离子型 ROS 氧化，用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS 经典检测方法。
使用方法：
染色方法：
1）探针溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液 中稀释到所需浓度，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液或灌流液中加入探针至所需浓度。
2）依据细胞ROS含量的不同，DHE终浓度可选择在1 μM-100 μM的范围，孵育时间可选择10-90 min。孵育可在37℃或室温进行，要求避光。
3）孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。
荧光显微照相操作方法：
1）对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2）荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞 红色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的DHE可发出蓝色荧光。
流式细胞分析操作方法：
1）对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5-1 mL冰冷PBS重悬细胞(5-10万)。
2）采用 480-535 nm 波长激发，测定 590 nm-610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS阳性细胞有较强的红色荧光。
注意事项：
1. DHE在光照和空气中易被氧化，注意避光保存。
2. 该试剂可用于体外培养活细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。
3. 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS 的变化。
保持方法：-20℃保存，6个月。
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