原理介绍:
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA Ladder。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上绿色FITC或Alexa488/红色荧光探针Cy3(Cyanine 3)标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
试剂盒组成:
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
TdT酶 |
100μl |
-20℃ |
Tunel反应液 |
5ml |
-20℃ |
HRP二抗 |
25ul |
-20℃ |
注意事项:
1. 为了获得理想的染色效果,应对通透方法时间及tunel工作液孵育时间进行摸索
2. 所有实验试剂应避免反复冻融,建议分装保存
3. 蛋白酶K处理后需充分洗涤去掉多余试剂
4. Tunel显色为避免假阳性,应严格控制显色过程,可短时间多次显色,镜下观察显色程度,切忌显色过度。
保存方式:-20℃,12个月
试剂盒组分请参考说明书里面组分保存要求,详细操作步骤请参考说明书。