货号: JFKR-M09-5ml / JFKR-M10-10ml(无酚红)
规格: 5ml/10ml
浓度: 8 - 12 mg/mL
来源: Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肿瘤
保存条件: -20°C,1年,-80°C,长期保存,
请在收到产品后根据需求分装, 避免反复冻融。
产品介绍:
基底膜是由连续的细胞外基质组成的膜状结构,用于分隔组织细胞(如内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞或神经元细胞等)与其相邻的结缔组织。基底膜在组织发育和伤口愈合的过程中会不断降解和再生。 它不仅支持着细胞和细胞层,还在细胞粘附、迁移、增殖和分化中发挥重要作用,并且还能发挥屏障功能,抵挡肿瘤细胞的迁移等。
标准型基质胶提取自Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)小鼠肿瘤中的可溶解基底胶,由细胞外基质蛋白组成,包括层粘胶蛋白(糖蛋白)、IV型胶原、巢蛋白、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和许多其他必需的生长因子等。
本产品已被证明能提供一个有效的无饲养层表面,用于人类胚胎干细胞(hESCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)的附着和维持。这对促进多能干细胞的扩增或研究干细胞分化具重要意义。
质量检测:
Ø 经PCR检测31种生物和病毒呈阴性,包括:支原体、 17种细菌和通常包括在小鼠抗体产生(MAP)测试中的病毒株,以及13种额外的小鼠感染因子, 包括LDEV。
Ø 按照USP无菌指南进行测试。
Ø LAL法测定内毒素浓度≤8 EU/mL
操作使用:
在2 - 8℃下解冻活凝胶基质过夜。不同冰箱温度可能会有所不同, 因此我们建议在解冻过程中将 基质胶置于冰上后,再将冰置于冰箱内。解冻的基质胶将在 10℃以上的温度下快速固化,因此在使用基质胶时,请将其置于冰上以防止过早凝固。
基质胶在37℃下可在20分钟内形成凝胶, 并在37℃下在培养基中保持凝胶状至少14天。
步骤:
1. 按照上述指南解冻基质胶;
2. 通过缓慢上下吸取使基质胶均质化;在此过程中小心且不要吸入气泡;
3. 用预冷的无血清培养基将基质胶稀释至所需浓度。对于原代细胞的繁殖,推荐使用1:100 稀释。也需要根据经验确定适合您的应用的最佳浓度;
4. 加入足量稀释后的基质胶以覆盖整个细胞生长表面。建议每平方厘米加入100 µL的基质胶稀释液
5. 在 37 ℃下孵育涂布后的培养皿 30 分钟;
6. 吸出表面涂层液体并立即铺板细胞,注意不能让涂层表面变干
注意:包被基质胶涂层的培养皿可以提前准备。请按照以下步骤进行:
1)按照步骤 1 至 4 进行操作;然后用封口膜封闭培养皿,在 2-8℃的冰箱中保存时长最长可达两周;
2)在使用前,室温孵育带涂层培养皿 1 小时;
3)继续步骤 6。
注意事项:
1. 基质胶应保存于-20℃以下,并避免反复冻融。
2. 基质胶应置于湿冰中,并放于 4℃冰箱过夜解冻。解冻后建议根据使用计划分装到无菌管中。
3. 基质胶具有可逆温敏性质,若因操作不当导致基质胶凝胶,可于 4℃放置 1~2 小时使其恢复液体状态。
4. 基质胶因化冻可能存在不均匀的情况,请用移液器吹吸使蛋白溶液恢复均匀状态。
5. 若基质胶中引入气泡,可于 0~4℃下低温 5000g 离心 1 分钟消除气泡。
运用范围:
仅供实验室研究使用,不适用于诊断程序;本品在诊断或其他临床应用中的安全性和有效性尚未确定。
由于来自不同供体或来源的组织/细胞的差异,批次可能会有所不同。
1,什么是类器官
类器官(Organoids)是器官特异性细胞类型的3D细胞集合,这些细胞从干细胞或器官祖细胞发育而来,并能以与体内相似的方式经细胞分序(cell sorting out) 和空间限制性的系别分化而实现自我组建。类器官满足以下特点
2,类器官的优点?
3,类器官原代遇到的问题?
4,在没有新鲜组织的情况下,可以用冻存组织提取的原代细胞进行3D培养吗?
答:文献虽有报道可以冻存组织进行2D或者3D培养,成功率较低,特别是对类器官的培养对细胞活性要求相对较高,不建议组织冻存后进行类器官培养。
5,类器官培养过程中,提取原代细胞后,红细胞需要去除吗?
答:肿瘤组织中本身含有(如:肝,肺等组织)大量红细胞。首先,可以在拿到组织后尽量多清洗几次,能够去除大部分的红细胞;其次,可以使用商品化的红细胞裂解液,也可以不做红细胞处理。
6,类器官冻存的时间和代数选取?
答:类器官冻存建议体积控制在200μm以内,冻存可以选择P2代以后的代数。
7,类器官最快多久可以构建成功?
答:肠道类器官生长速度较快,1-2h可以观察到类器官形态。
8,目前可以通过那些手段辅助鉴别类器官?
答:目前通用的是明场显微镜和病理染色观察形态;结合基因测序可以鉴定所培养的类器官是否有丢失和供体来源的一致性。
9,类器官和肿瘤球有什么区别?
答:类器官包含多种不同类型的细胞,可以在体外自我分化自我组装,具有干性可以进行传代;肿瘤球为单一细胞系通过外=外界物理条件成球,且肿瘤球在后期培养过程中,中间部位会因氧气,营养不足而出现部分死亡。
10,如何避免原代培养中的污染问题?
答:动物源性的样本一般比人源的更容易污染,尤其是一些胃肠、泌尿系统,培养过程可以添加3-5%庆大霉素或者青链霉素,实验室常用抗真菌试剂。