原理：
一抗识别抗原，hrp标记二抗识别一抗，hrp催化中间体TY永久性标记抗原且实现信号放大，红色色原特异性识别TY产物 （共价结合），从而实现了红色信号的累积，完成了红色显色.不同于传统的 碱性磷酸酶 AEC或AP-red等红色信号（不能中性树胶封片），此方法/试剂盒 可以实现红色信号的永久性封片/ 中性树胶封片。
试剂盒组成：
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名称 |
货号 |
规格 |
保存条件 |
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TY原液(100x) |
RCF040-1A |
60μl |
4℃ |
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TY稀释液 |
RCF040-1B |
6mL |
4℃ |
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PB |
RCF040-2 |
10mL |
-20℃ |
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AC |
RCF040-3 |
1.2mL |
-20℃ |
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CU |
RCF040-4 |
500μl |
-20℃ |
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红色色原 |
RCF040-5 |
100μl |
-20℃ |
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高敏多聚体hrp抗兔二抗 |
RCA054 |
5mL |
4℃ |
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抗体稀释液 |
RC01 |
10mL |
4℃ |
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3%过氧化氢 |
RC012 |
10mL |
4℃ |
*红色显色使用方法： hrp二抗孵育完了之后，加入即用型TY反应 20min左右，然后PBS洗三次，之后加入红色显色液工作液(PB:CU:AC:红色色原=86:4:10:1)，反应15分钟以上（以上试剂使用之前注意解冻恢复为液体状态，使用前混匀离心）
其他自备试剂：PBS，修复液，苏木素等
红色显色使用方法：
HRP二抗孵育完了之后，加入TY反应液（TY原液：TY稀释液=1:100）室温孵育 20min左右，然后PBS洗三次，之后 加入红色显色液工作液(PB:CU:红色色原：AC=860:40:1:100)，反应15分钟以上（以上试剂 使用之前 注意解冻回复为液体状态 必要时 混匀 离心）
存储方式：按保存条件 -20℃/4℃保存，一年有效期。
1,如何选择mIHC多重荧光免疫组化的抗体？
石蜡切片免疫组化/免疫荧光：选择包含IHC-P / mIHC；
冰冻切片免疫组化/免疫荧光：选择包含IHC-fr；
细胞爬片免疫组化/免疫荧光：选择包含ICC/IF。
**若抗体说明书上未明确标注IHC是P还是Fr，我们通常默认为两者均适用（具体还需参考说明书内容）。
请注意区分抗体的宿主种属和反应种属的概念。宿主种属指的是抗体从哪种动物中制备，而反应种属则是指该抗体能与哪些样本种属结合。
**抗体的反应种属应涵盖样本种属。**
**原则上，抗体的宿主种属不应与客户样本种属相同。**
**样本为小鼠，应尽量避免使用小鼠来源的一抗，因为若一抗选用小鼠来源，二抗也需使用抗小鼠的二抗，这可能会与小鼠体内的IgG结合，导致产生非特异性反应。若必须使用与样本同种属来源的一抗，建议进行阴性对照实验（在不加一抗的情况下加入二抗，以检测是否存在非特异性反应）。
2, HRP二抗和多聚HRP二抗的区别 ?
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HRP二抗和多聚HRP二抗的区别 |
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特性 |
HRP二抗（浓缩型） |
多聚HRP二抗（即用型） |
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适用实验（优先推荐） |
Western Blot (WB)、ELISA |
IHC、mIHC（多重荧光免疫组化） |
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类型 |
常规单分子HRP标记 |
多聚体HRP标记（信号放大结构） |
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稀释要求 |
需按比例稀释（节省成本） |
即用型，无需稀释（操作便捷） |
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灵敏度 |
常规灵敏度（适合高丰度靶标） |
超高灵敏度（低丰度靶标首选） |
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分子量 |
小分子量（穿透性好，适合WB膜） |
大分子量（穿透性受限，不适用WB） |
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