原理介绍:
一抗与组织上的抗原特异性结合后，加入多聚辣根过氧化物酶蛋白(HRP)二抗，HRP将生物素标记Tyramide活化，后者与相邻的蛋白上的酪氨酸残基生成稳定的共价结合，目的蛋白上会富集大量带有生物素标记的酪胺，使信号放大，生物素与HRP酶标记的亲和素发生特异性反应，使信号进一步放大，是检测免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)和原位杂交(ISH)中低丰度目标的最灵敏方法。
试剂盒组成：
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名称 |
货号 |
规格 |
保存条件 |
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多聚HRP-山羊抗兔二抗 |
RCA054 |
即用型，5mL |
4℃ |
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TYR-Biotin |
RCB01A |
浓缩型，200X 50ul |
4℃ |
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信号放大稀释液 |
RCB01B |
6mL |
4℃ |
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HRP-链霉亲和素 |
RCB01C |
浓缩型，100X 50ul |
4℃ |
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3%过氧化氢 |
RC012 |
10mL |
4℃ |
注：TYR-Biotin用信号放大稀释液按1：200比例稀释（若一抗孵育时间常温 1h-3h内，建议稀释比例 1:100- 1:200, 若一抗孵育时间 4 度过夜（12h 或以上），建议稀释比例 1:200- 1:400 或更高），浓缩型HRP-链霉亲和素用PBS或者抗体稀释液1：100稀释。
保存方式：4℃保存，一年有效期
1,如何选择mIHC多重荧光免疫组化的抗体？
石蜡切片免疫组化/免疫荧光：选择包含IHC-P / mIHC；
冰冻切片免疫组化/免疫荧光：选择包含IHC-fr；
细胞爬片免疫组化/免疫荧光：选择包含ICC/IF。
**若抗体说明书上未明确标注IHC是P还是Fr，我们通常默认为两者均适用（具体还需参考说明书内容）。
请注意区分抗体的宿主种属和反应种属的概念。宿主种属指的是抗体从哪种动物中制备，而反应种属则是指该抗体能与哪些样本种属结合。
**抗体的反应种属应涵盖样本种属。**
**原则上，抗体的宿主种属不应与客户样本种属相同。**
**样本为小鼠，应尽量避免使用小鼠来源的一抗，因为若一抗选用小鼠来源，二抗也需使用抗小鼠的二抗，这可能会与小鼠体内的IgG结合，导致产生非特异性反应。若必须使用与样本同种属来源的一抗，建议进行阴性对照实验（在不加一抗的情况下加入二抗，以检测是否存在非特异性反应）。
2, HRP二抗和多聚HRP二抗的区别 ?
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HRP二抗和多聚HRP二抗的区别 |
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特性 |
HRP二抗（浓缩型） |
多聚HRP二抗（即用型） |
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适用实验（优先推荐） |
Western Blot (WB)、ELISA |
IHC、mIHC（多重荧光免疫组化） |
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类型 |
常规单分子HRP标记 |
多聚体HRP标记（信号放大结构） |
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稀释要求 |
需按比例稀释（节省成本） |
即用型，无需稀释（操作便捷） |
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灵敏度 |
常规灵敏度（适合高丰度靶标） |
超高灵敏度（低丰度靶标首选） |
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分子量 |
小分子量（穿透性好，适合WB膜） |
大分子量（穿透性受限，不适用WB） |
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