组化双染试剂盒(兔鼠通用二抗)

IHC double staining kit (rabbit mouse universal secondary antibody)(#RCF040RM)
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产品信息

原理介绍:

一抗识别抗原,hrp标记二抗识别一抗,hrp催化中间体TY永久性标记抗原且实现信号放大,红色色原特异性识别TY产物 (共价结合),从而实现了红色信号的累积,完成了红色显色.常规免疫组化染色用DAB,形成棕色物质。DAB棕色+红色,形成了独特的组化双染颜色,该组化双染信号可以中性树胶封片,不同于传统的 碱性磷酸酶 AEC或AP-red等红色信号(不能中性树胶封片)。

 

试剂盒组成(100T):

名称

货号

规格

保存条件

TY原液(100x)

RCF040-1A

60μl

4℃

TY稀释液

RCF040-1B

6mL

4℃

PB

RCF040-2

10mL

-20℃

AC

RCF040-3

1.2mL

-20℃

CU

RCF040-4

500μl

-20℃

红色色原

RCF040-5

100μl

-20℃

DAB原液(100x)

RCD002-A

60μl

4℃

DAB稀释液

RCD002-B

6mL

4℃

高敏多聚体hrp抗兔鼠二抗

RCB054

10mL

4℃

抗体稀释液

RC01

20mL

4℃

3%过氧化氢

RC012

20mL

4℃

*红色显色使用方法: hrp二抗孵育完了之后,加入即用型TY反应 20min左右,然后PBS洗三次,之后加入红色显色液工作液(PB:CU:AC:红色色原=86:4:10:1),反应15分钟以上(以上试剂使用之前注意解冻恢复为液体状态,使用前混匀离心)

其他自备试剂:PBS,修复液,苏木素等

 

石蜡切片免疫组化双染结果判读:

苏木素染细胞核为蓝色,第一指标DAB显出的阳性表达为棕黄色,第二指标红色显色的阳性表达为红色或粉红色。

 

组化双染注意事项:

1.  DAB 显色尽量不要过深,过深会影响红色显色效果

2. 双染的两个抗原 尽量表达位置不同(如标记不同细胞 或者 不同表达位置),不适用于两个抗原的共定位(不同于荧光的共定位)

3. 红色显色抗原所对应的一抗抗体浓度适当提高一些,组化二抗应使用高敏多聚二抗。

4. 可以第一标红色,第二标DAB棕色

 

试剂盒保存方式:4℃/﹣20℃保存,一年有效期。

FAQ
1、抗体选择FAQ收起

1,如何选择mIHC多重荧光免疫组化的抗体?

 

石蜡切片免疫组化/免疫荧光:选择包含IHC-P / mIHC

冰冻切片免疫组化/免疫荧光选择包含IHC-fr

细胞爬片免疫组化/免疫荧光选择包含ICC/IF

**若抗体说明书上未明确标注IHCP还是Fr,我们通常默认为两者均适用(具体还需参考说明书内容)。

请注意区分抗体的宿主种属和反应种属的概念。宿主种属指的是抗体从哪种动物中制备,而反应种属则是指该抗体能与哪些样本种属结合。

**抗体的反应种属应涵盖样本种属。**

**原则上,抗体的宿主种属不应与客户样本种属相同。**

**样本为小鼠,应尽量避免使用小鼠来源的一抗,因为若一抗选用小鼠来源,二抗也需使用抗小鼠的二抗,这可能会与小鼠体内的IgG结合,导致产生非特异性反应。若必须使用与样本同种属来源的一抗,建议进行阴性对照实验(在不加一抗的情况下加入二抗,以检测是否存在非特异性反应)。

 

2, HRP二抗和多聚HRP二抗的区别 ?

HRP二抗和多聚HRP二抗的区别

特性

HRP二抗(浓缩型)

多聚HRP二抗(即用型)

适用实验(优先推荐)

Western Blot (WB)、ELISA

IHC、mIHC(多重荧光免疫组化)

类型

常规单分子HRP标记

多聚体HRP标记(信号放大结构)

稀释要求

需按比例稀释(节省成本)

即用型,无需稀释(操作便捷)

灵敏度

常规灵敏度(适合高丰度靶标)

超高灵敏度(低丰度靶标首选)

分子量

小分子量(穿透性好,适合WB膜)

大分子量(穿透性受限,不适用WB)

 

支持与下载

Datasheet

参考实验步骤